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Perdida de la expresion antigenica ABH en pacientes con lesiones orales precancerosas y cancerosas
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Autor: Carlos Campi
Publicado: 14/04/2008
 

Los antígenos ABH, productos de la interacción de dos sistemas genéticos Hh y ABO, están sujetos a leyes de herencia y pueden estar localizados no sólo en los eritrocitos sino también en la mayoría de las células humanas. El objetivo del este trabajo fue investigar la expresión de antígenos ABH en pacientes con lesiones orales pre-malignas y malignas orales.


Perdida de antigenos ABH en cancer oral.1

Pérdida de la expresión antigénica ABH en pacientes con lesiones orales precancerosas y cancerosas.

 

TITULO BREVE: Pérdida de antígenos ABH en cáncer oral

 

*Odontólogo Carlos Campi, *Prof. Dra. Livia Escovich, Prof. Dra. Amelia Racca, Dra Silvia García Borrás, Est. Liliana Racca, Dr. Carlos Cotorruelo, Dra. Claudia Biondi

 

Laboratorio de Inmunohematología Histocompatibilidad e Inmunogenética. Departamento de Bioquímica Clínica. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas. Universidad Nacional de Rosario. Suipacha 531. 2000 Rosario. Argentina.

*Cátedra de Estomatología. Facultad de Odontología. Universidad Nacional de Rosario. Córdoba 3100. 2000 Rosario. Argentina.

 

Resumen

 

Los antígenos ABH, productos de la interacción de dos sistemas genéticos Hh y ABO, están sujetos a leyes de herencia y pueden estar localizados no sólo en los eritrocitos sino también en la mayoría de las células humanas. El objetivo del este trabajo fue investigar la expresión de antígenos ABH en pacientes con lesiones orales pre-malignas y malignas orales.

 

Se trabajó con muestras incluidas en tacos de parafina de pacientes con lesiones orales (n= 57). Los pacientes fueron clasificados en 2 grupos:

 

a) lesiones premalignas y malignas diagnosticadas clínica y anatomopatológicamente

b) lesiones benignas (n=93).

 

Se investigaron los antígenos ABH por la técnica de inmunoadherencia específica modificada. Se utilizó la adherencia al tejido vascular como control positivo y al tejido adiposo como control negativo. Los resultados fueron semicuantificados desde adherencia fuertemente positiva a negativa. Hemos encontrado una significativa relación entre la expresión antigénica ABH y el grado de malignidad de las lesiones analizadas. (P Yates= 0.005) Una pérdida de reactividad ABH en los sitios de mayor invasividad tumoral se correlaciona con el grado del desarrollo del tumor, el grado histológico y su malignidad.

 

Palabras clave: antígenos ABH; lesiones orales pre malignas, lesiones orales malignas

 

Abstract

 

In most human carcinomas, including oral carcinoma, a significant event is decreased expression of histo-blood-group antigens A, B and H. The mechanisms of aberrant expression of blood-group antigens are not clear in all cases.

 

Objective: To investigate the association of ABO blood groups and oral cancer, we study the expression of ABH antigen in tissues of premalignant lesions and malignant tumors diagnosed. Material and methods: In total 57 subjects were examined, whom suffered from oral pre-cancerous and cancerous lesions, while 93 subjects were the the group with benign lesions. All tumors were histological confirmed. Results: We found a significant relationship between antigen expressions and maligned of the lesions analyzed. (P Yates= 0.005). A loss of ABH reactivity within the most invasive sites of the tumors correlated significantly with the stage of tumor development and histological grade of malignancy.

 

Conclusions: These findings support the view that features regarding the cells of deeper parts of the carcinomas are very important for the clinical behavior of the tumors and that loss of ABH-antigen expression is related to the stage of the tumor and invasion of carcinoma cells.

 

Key words: ABH antigens; pre malignant oral lesions, malignant oral lesions

 

Introducción

 

La expresión de los antígenos del grupo sanguíneo ABO, no está limitada a los glóbulos rojos, también están presentes en la superficie de otras células del organismo y en las secreciones. Estos antígenos confieren propiedades biológicas esenciales, participan en el recambio y el tráfico transcelular y tienen gran importancia para la interacción celular durante el desarrollo y crecimiento. Estos antígenos pluritisulares son productos secundarios de genes que codifican glucosiltransferasas específicas y su expresión está bajo regulación sinérgica de varios sistemas genéticos entre los que se encuentran el sistema ABO, Hh, Ii, Lewis y el carácter secretor del individuo. (1,2)

 

Alteraciones en la expresión antigénica ABH en síndromes hematológicos malignos fue descripta primeramente por van Loghem, quien observó una débil expresión del antígeno A en un paciente con leucemia mieloide aguda. Actualmente la pérdida de la reactividad de los antígenos A, B, H de la superficie de los hematíes es reconocida como un fenómeno recurrente en procesos hematológicos malignos. (3,4). Se considera que la ausencia de los antígenos A, B en estas patologías es consecuencia de una alteración en los genes que codifican las glicosiltransferasas. En pacientes con pérdida de estos antígenos, una proporción variada de células rojas no son capaces de aglutinar con los reactivos específicos, dando una reacción característica de campo mixto. Igualmente este tipo de reacciones puede aparecer en individuos sanos asociados a raros alelos que codifican a los genes ABO. (5)

 

Existe amplia evidencia de que el cáncer está asociado con anormalidades en la regulación génica que se expresa en la superficie de la membrana celular. Una alteración en ese mecanismo puede actuar por bloqueo directamente de las moléculas superficiales de la célula que median la interacción, o derivar su síntesis y organización del desarrollo y la diferenciación (4, 5). En tumores, es posible encontrar cambios tanto en los glicolípidos como en las glicoproteínas (6, 7). La mayoría de los estudios han investigado las alteraciones en los carbohidratos de la superficie celular. En recientes investigaciones, se ha demostrado  que las modificaciones en la glicosilación participan en la mayoría de los fenotipos malignos, incluyendo señales de transducción y apoptosis (8, 9) Considerando que la mayoría de los cánceres humanos se originan a partir de células epiteliales, los cambios en los grupos sanguíneos constituyen un tópico importante en la inmunología tumoral.

 

El objetivo de este trabajo fue investigar la expresión antigénica ABH en cortes histológicos de pacientes con lesiones orales pre-malignas y malignas.


Perdida de antigenos ABH en cancer oral.2

Materiales y métodos

 

Se trabajó con muestras de pacientes con lesiones orales pre-malignas y malignas (n=57) clasificados según el grado anatomopatológico, e individuos con lesiones orales benignas (n=93). También se analizó una población de individuos sin patología demostrable (n=81) Todos los pacientes estudiados fueron derivados de la Cátedra de Estomatología de la Universidad Nacional de Rosario, con consentimiento informado previo.

 

Los antígenos ABH en células de cortes histológicos de pacientes con lesiones orales pre-malignas y malignas fueron estudiados por la técnica de inmunoadherencia (10). Las lesiones benignas fueron analizadas por la misma técnica. Se obtuvo muestra de mucosa yugal de los pacientes que fueron considerados controles normales. Se utilizó la técnica de inhibición de la aglutinación para detectar la presencia de antígenos solubles de grupo sanguíneo ABO.

 

Células de mucosa yugal: Se obtuvieron por raspado de la cavidad interna de la boca y colectadas en tubo con 1mL de solución salina. Las mismas fueron sometidas a sucesivos choques térmicos (3 veces). Se centrifugaron las muestras y se trabajó con el sobrenadante.


 

Técnica de inhibición de la aglutinación: (11)

 

Se realizaron 3 baterías de diluciones geométricas al medio, del material en estudio (células de mucosa yugal) en Buffer Fosfato Salino (PBS) pH 7,4. Se enfrentó cada batería con igual volumen de antisueros de distinta especificidad: anti-A, anti-B y lectina Ulex europeus, convenientemente diluidos. Los tubos se incubaron 10 minutos a temperatura ambiente y se revelaron con una suspensión de glóbulos rojos isogrupo al 5% en PBS. Se centrifugó a 1000 RPM durante 1 minuto y se observó aglutinación macroscópica. Con esta técnica se evalúa en forma indirecta la presencia de antígenos ABH solubles.

 

Técnica de inmunoadherencia (10)

 

Las muestras de tejido proveniente de las lesiones orales pre-malignas y malignas (n=57) conservadas en taco de parafina fueron sometidas a cortes con micrótomo, de manera de obtener secciones de 4 mm de espesor, y posteriormente fueron adheridos sobre un portaobjetos. Luego se desparafinaron por cambios en solvente xilol y alcohol, se colorearon con hematoxilina y lavaron con buffer Tris-salina isotónico pH7,4 durante cinco minutos eliminando el exceso de buffer.

 

Las secciones fueron cubiertas durante diez minutos, a temperatura ambiente, con antisuero monoclonal anti-A, anti-B o lectina anti-H (Ulex europeus), en concentración óptima de acuerdo al grupo sanguíneo específico del paciente. Los portaobjetos colocados en un vaso de Coplic se incubaron 3 veces con buffer Tris durante 15 minutos para eliminar el antisuero o la lectina anti-H en exceso. Cada sección fue cubierta con una suspensión de eritrocitos isogrupo al corte en estudio al 5% en PBS, durante 15 minutos. Los glóbulos rojos pueden adherirse a la sección de tejido, desparafinado vía antisuero o lectina.

 

Posteriormente, se colocaron los preparados invertidos, sobre dos barras soporte, en una caja de Petri conteniendo buffer Tris, para que los eritrocitos estén en contacto con la solución buffer, lo cual permite eliminar los eritrocitos no adheridos. Se incubó durante 30 minutos y se observaron microscópicamente. Se utilizaron como controles positivos el tejido vascular y como controles negativos el tejido adiposo.

 

Interpretación:

 

Los resultados fueron semicuantificados desde adherencia fuertemente positiva (++++) a adherencia negativa (-) de acuerdo al porcentaje de células del tejido en estudio con hematíes adheridos. Se utilizaron para designar niveles intermedios de adherencia: + equivalente al 25% de adherencia, ++ a 50% y +++ a 75%.

 

Análisis estadístico

 

Se aplicó el test de chi cuadrado para el análisis de posibles asociaciones entre las variables predictivas y de impacto en el estudio. Se calcularon razones de Odds y se estimaron los intervalos de confianza.

 

Resultados

 

Los datos obtenidos de la expresión ABH en muestras de tejidos de lesiones orales se presentan en la tabla 1. Se observa una asociación significativa entre deleción de los antígenos ABH en muestras de lesiones orales y grado de malignidad de las lesiones orales (p Yates= 0,005). Las lesiones analizadas  de precáncer y cáncer oral mostraron una deleción del 89,4% en las muestras analizadas, mientras que el 10,6% conservó la expresión antigénica ABH.  En las lesiones benignas diagnosticadas anatomopatológicamente, el 38,7% de las mismas presentaron una pérdida de la reactividad antigénica y el 61,3% restante conservó su expresión.

Al analizar la presencia de antígenos ABH en muestras de mucosa yugal por la técnica de inhibición de la hemaglutinación en los 81 pacientes sin patología demostrable (controles normales) se observó que todas (100%) conservaban su reactividad.

 

Discusión

 

Los glucoconjugados de membrana de las células epiteliales presentan carbohidratos antigénicos relacionados con las sustancias de grupo sanguíneo. Durante la progresión a la malignidad, estos oligosacáridos inmunodominantes sufren alteraciones específicas. El cambio más frecuente y destacable en las determinantes de grupo sanguíneo asociado con cáncer humano es la deleción de antígenos de grupos sanguíneos A, B o H (6,7).

 

En el diagnóstico histopatológico de rutina, la clasificación del tipo de tumor está basado en la apariencia histológica de la mayoría de las partes diferenciadas del tumor. Por otro lado, el pronóstico de la enfermedad está basado parcialmente en el grado de diferenciación del tejido. En la mayoría de los casos el grado de diferenciación está determinado por la morfología celular del tejido analizado y por la capacidad de las células de sintetizar productos específicos tales como queratina y mucina. Previamente ha sido demostrado que la expresión  de los carbohidratos sobre la superficie celular de epitelio estratificado está relacionado a la diferenciación celular (12; 13)

 

En el presente trabajo, hemos utilizado la pérdida de la expresión de los antígenos ABH como marcador de diferenciación celular. Como la expresión de estos antígenos puede ser detectada a través de anticuerpos monoclonales, constituye un marcador de diferenciación más comúnmente utilizado en ensayos histológicos subjetivos. Se acepta que los tumores están compuestos por poblaciones celulares heterogéneas con distinto comportamiento biológico. Para obtener una óptima información del pronóstico sobre el tumor, se debería estudiar todas las subpoblaciones celulares. Si la biopsia recogida no es representativa del tumor, el estudio de la reactividad ABH puede ser relacionado con el grado del tumor en estudio. Esto podría ser valor diagnóstico y pronóstico de la patología en estudio. Estudios similares de deleción de antígenos ABH en cáncer de vejiga mostraron una asociación con peor pronóstico de la enfermedad. (14,15 y 16)


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La mayoría de los estudios relacionados a la localización de los antígenos  de grupo sanguíneo en los tejidos han indicado que los mismos corresponden al grupo sanguíneo eritrocitario. (2, 17) Asimismo, la expresión de estos antígenos en tejidos normales es dependiente del tipo de diferenciación del epitelio y del grado de maduración de la célula individual en el epitelio. En epitelio estratificado, la expresión de dichos antígenos depende del grado de maduración celular presentando una elongación secuencial del carbohidrato terminal de la cadena durante su vida media.

 

En el presente trabajo, el análisis de los cortes de tejidos demostró que los pacientes con mayor grado de malignidad, o con lesiones pre malignas presentaron una deleción total o parcial de los antígenos de grupo sanguíneo ABH. La pérdida antigénica observada en las células de lesiones pre malignas y malignas podría ser consecuencia de un paro en la maduración de los antígenos celulares. Además, la pérdida de la expresión de los antígenos en las secciones de tejido de las lesiones tumorales, se encuentra significativamente correlacionada con el grado del desarrollo del tumor y el grado de malignidad histológico.

 

Los estudios de los pacientes con lesiones orales premalignas y malignas, mostraron que la pérdida de la expresión antigénica ABH, podría ser utilizados como marcadores de riesgo en el desarrollo de cáncer oral. Los antígenos A, B y H que están presentes en la superficie de los eritrocitos, también se encuentran en todos los tejidos epiteliales y endoteliales (12). Cuando las células normales se transforman en malignas estos antígenos se pierden y por lo tanto, esta deleción podría ser utilizada como una herramienta de diagnóstico para la detección y pronóstico del cáncer oral.

 

En conclusión, nuestros resultados indicarían que al mismo tiempo que ocurren cambios morfológicos durante el proceso de carcinogénesis oral, otras series de eventos ocurren. De todos modos, mayores estudios son requeridos para clarificar el rol de los marcadores predictivos en lesiones precursoras de cáncer oral.

 

 

Tabla.  Asociación entre histoantígenos ABH y patología oral:

 

 

                                                     PRECÁNCER                  BENIGNAS

                                                       CÁNCER

 

DELECIÓN (parcial o total)                  51                                       36

 

CONSERVACIÓN                                 6                                        57

 

 

 

 

Bibliografía

 

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