Identificacion de bacterias y hongos mas frecuentes aislados de 120 muestras liquido de dialisis peritoneal continua ambulatoria
Autor: Sandra Lorena Bolívar Navarro | Publicado:  7/12/2012 | Microbiologia y Parasitologia , Enfermedades Infecciosas , Nefrologia , Articulos , Imagenes de Enfermedades Infecciosas , Imagenes de Microbiologia y Parasitologia , Imagenes de Nefrologia , Imagenes | |
Identificacion de bacterias y hongos mas frecuentes en dialisis peritoneal continua ambulatoria .16

1. Del sedimento hacer dos láminas, colocando dos gotas en cada una dejándola secar a temperatura ambiente.
2. No extender mucho la gota ya que cuando los elementos están escasos se dificulta hacer el recuento diferencial
3. Colocar una lámina con la coloración de Wright: colocar 3 gotas del colorante de Wright sobre el extendido del líquido e inmediatamente agregar 3 ó 4 gotas de buffer mezclar con perilla y dejar en reposo por 5 minutos, luego lavar con agua y secar a temperatura ambiente, observar a 100x para hacer el recuento diferencial y reportar el porcentaje de células.

ANEXO E. COLORACIÓN DE GRAM

Debe su nombre al Bacteriólogo Danés Christian Gram que la desarrolló en 1844. Es una tinción diferencial, clasificando a las bacterias en Grampositivas y Gramnegativas, de acuerdo a las propiedades de su pared celular:

germenes_dialisis_peritoneal/gram_positivas_negativas

Autor Ramírez R, Padilla J. Disponible en:
http://ri.ues.edu.sv/151/1/10135964.pdf

Los pasos a seguir para realizar la tinción son los siguientes:

1º Fijamos la muestra mediante calor.
2º Violeta cristal (Tiñe todas las baterías, grampositivas y grfamnegativas) 1´.
3º Fijamos con Lugol, 1´.
4º Decoloremos con una mezcla alcohol-cetona (los gramnegativos se decoloren).
5º Safranina (colorante de contraste, tiñe a los gramnegativos), 1´.

Los tiempos para aplicar cada colorante son orientativos. En la tinción se Observarán de color azul-violeta las grampositivas y de color rosa las gramnegativas. 

germenes_dialisis_peritoneal/bacterias_grampositivas_gramnegativas

Autor Ramírez R, Padilla J. Disponible en:
http://ri.ues.edu.sv/151/1/10135964.pdf

Los fundamentos de la técnica se basan en las diferencias entre las paredes celulares de las bacterias Gram positivas y Gram negativas. La pared celular de las bacterias Gram positivas posee una gruesa capa de peptidoglucano, además de dos clases de ácidos teicoicos: Anclado en la cara interna de la pared celular y unido a la membrana plasmática, se encuentra el ácido lipoteicoico, y más en la superficie, el ácido teicoico que está anclado solamente en el peptidoglucano (también conocido como mureína).

Por el contrario, la capa de peptidoglucano de las Gram negativas es delgada, y se encuentra unida a una segunda membrana plasmática exterior (de composición distinta a la interna) por medio de lipoproteínas. Tiene una capa delgada de peptidoglucano unida a una membrana exterior por lipoproteínas. La membrana exterior está hecha de proteína, fosfolípido y lipopolisacárido.

La diferencia que se observa en la resistencia a la decoloración, se debe a que la membrana externa de las Gram negativas es soluble en solventes orgánicos, como por ejemplo la mezcla de alcohol/acetona. La capa de peptidoglucano que posee es demasiado delgada como para poder retener el complejo de cristal violeta/yodo que se formó previamente, y por lo tanto este complejo se escapa, perdiéndose la coloración azul-violácea. Pero por el contrario, las Gram positivas, al poseer una pared celular más resistente y con mayor proporción de peptidoglicanos, no son susceptibles a la acción del solvente orgánico, sino que este actúa deshidratando los poros cerrándolos, lo que impide que pueda escaparse el complejo cristal violeta/yodo, y manteniendo la coloración azul-violácea.

ANEXO F. MEDIOS DE CULTIVO UTILIZADOS

AGAR CHOCOLATE 

germenes_dialisis_peritoneal/cultivo_agar_chocolate

AGAR SANGRE 

germenes_dialisis_peritoneal/cultivo_agar_sangre

Medio para propósitos generales, para el aislamiento y cultivo de numerosos microorganismos.



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Revista de Medicina y Ciencias de la Salud, de periodicidad quincenal, dirigida a los profesionales de la Salud de habla hispana. ISSN 1886-8924