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Expresión de Selectina E en granuloma piógeno de la cavidad oral

Expresión de Selectina E en granuloma piógeno de la cavidad oral

Resumen

El granuloma piógeno es considerado como una hiperplasia inflamatoria de naturaleza no neoplásica. Debido a sus características moleculares, esta lesión ha sido considerada como un ejemplo de angiogénesis inflamatoria. Desbalance entre factores pro-angiogénicos y anti-angiogénicos, así como expresión de diferentes citocinas están involucradas en el desarrollo de esta enfermedad. Durante el proceso inflamatorio células del endotelio son activadas y expresan Selectina E. Esta proteína participa en la adherencia de leucocitos para permitir la migración a través de los vasos. Sin embargo, expresión de Selectina E no ha sido analizada en granuloma piógeno oral. Nuestros resultados mostraron la distribución de la proteína en muestras de granuloma piógeno oral. Estas observaciones contribuyen a entender mejor esta patología muy común en el área odontológica.

Autores:

  1. en C. Gustavo Martínez Coronilla 1, M. en C. Jorge A. López Mendoza 2, Dr. Ernesto A. Beltrán Partida 2, Dra. Lourdes Montaño Pérez 2, M. en C. Zureya Fontes García 2, Dra. Yolanda Bojórquez Anaya 2, C.D. Jesús A. Camacho Mondragón 2, Dr. Nicolás Serafín Higuera 3

(1) Facultad de Medicina Mexicali, Unidad de Ciencias de la Salud, Universidad Autónoma de Baja California

(2) Facultad de Odontología Mexicali, Universidad Autónoma de Baja California

(3) Facultad de Odontología Mexicali, Unidad de Ciencias de la Salud, Universidad Autónoma de Baja California

Correspondencia: Dr. Nicolás Serafín Higuera

Facultad de Odontología Mexicali, Unidad de Ciencias de la Salud, Universidad Autónoma de Baja California. Zotoluca y Chinampas, s/n, Fraccionamiento Calafia, CP 21040

Palabras clave: Inmunohistoquímica, Selectina E, Granuloma piógeno oral

 

Introducción

El granuloma piógeno es considerada como una hiperplasia inflamatoria de naturaleza no neoplásica, que puede presentarse en la piel o en cavidad oral, en esta última es principalmente encontrado sobre tejido queratinizado (Jafarzadeh, Sanatkhani et al. 2006).  Son más comunes en el maxilar superior que en la región mandibular y es más frecuente en regiones anteriores que posteriores (Lee, Sinno et al. 2011, Waraasawapati, Koonmee et al. 2013). El Granuloma piógeno en una lesión que no es de origen granulomatoso, ya que no presenta pus, ni tampoco de naturaleza infecciosa, el termino histológico hemangioma capilar lobular es preferible, el cual describe cúmulos de capilares arreglados en una arquitectura lobular   (Lee, Sinno et al. 2011, Waraasawapati, Koonmee et al. 2013).

Clínicamente el granuloma piógeno es una lesión lisa o exofítica lobulada, con pápulas eritematosas de color rojo, la cual puede presentarse con una base sésil o pediculada (Vassilopoulos, Tosios et al. 2011). Su tamaño es variable ya que va de unos cuantos milímetros hasta varios centímetros de diámetro (Vassilopoulos, Tosios et al. 2011). El crecimiento se puede desarrollar en forma lenta o rápida, es asintomático y puede estar ulcerado y friable (Vassilopoulos, Tosios et al. 2011). Su color es variable, ya que puede tener una cubierta de color amarillo, hasta colores que van de rosa o rojo a color purpura, esto depende del tiempo de evolución de la lesión (Vassilopoulos, Tosios et al. 2011). Debido a que está muy vascularizado, al menor trauma tiende a sangrar (Vassilopoulos, Tosios et al. 2011). El término “tumor del embarazo” es por el desarrollo del granuloma piógeno gingival en el 5% de las mujeres grávidas (Vassilopoulos, Tosios et al. 2011)

Debido a sus características moleculares, esta lesión ha sido considerada como un ejemplo de angiogénesis inflamatoria (Vassilopoulos, Tosios et al. 2011). Adicionalmente, la etiopatogénesis del granuloma piógeno es pobremente entendida (Godfraind, Calicchio et al. 2013) y se ha sugerido que puede surgir en respuesta a ciertos estímulos como traumas e irritación local (exfoliación de dientes primarios, espículas óseas, traumas por cepillado, irritación por placa gingival, cálculos sobre todo cuando se localizan en la encía), factores hormonales, o uso de cierta clase de medicamentos (Godfraind, Calicchio et al. 2013). Fue sugerido que el desbalance entre factores pro-angiogénicos y anti-angiogénicos está involucrado en el desarrollo de esta enfermedad; por ejemplo, la sobreexpresión de proteínas como VEGF (vascular endotelial growth factor) y bFGF (basic fibroblastic growth factor) han sido ampliamente descrita en Granuloma piógeno, así como una disminución en la expresión de proteínas anti-angiogénicas como angiostatina y trombospondina-1  (Vassilopoulos, Tosios et al. 2011). Adicionalmente, diferentes citocinas han sido estudiadas en granuloma piógeno, como Factor de necrosis tumoral alfa (Yuan and Lin 2004).

Por otra parte, el endotelio está formado por un grupo de células que revisten la luz del vaso; un endotelio sano tiene funciones como el mantenimiento de la fluidez sanguínea, permeabilidad vascular y el mantenimiento de los leucocitos dentro de la luz del vaso, esto lo logra mediando diferentes moléculas en su superficie (Pober and Sessa 2007). Pero, cuando los tejidos son agredidos por algún estado inflamatorio, diferentes acontecimientos estimulan el aumento local en el flujo sanguíneo, como la permeabilidad vascular que permite que un grupo rico en proteínas de la sangre se desplacen de la  luz del vaso hacia el tejido dañado y provoque signos de la inflamación (Pober and Sessa 2007).

Los neutrófilos tienden a desplazarse hacia las células endoteliales y adosarse a las superficies, y son conocidos como neutrófilos marginales; el endotelio interactúa con estas células por medio de la expresión de moléculas de adhesión llamadas selectinas, posteriormente los neutrófilos ruedan (rolling) sobre el endotelio; finalmente, estas células se adhieren y atraviesan las células endoteliales para llegan al tejido dañado (Vestweber 2007). La adhesión de los leucocitos al endotelio de los vasos sanguíneos, es considerado un paso muy importante para la extravasación de estas células durante la inflamación. En este proceso moléculas de adhesión como la Selectina E tiene una gran participación (Vestweber 2007).

Hasta donde nosotros sabemos, no hay reportes en donde se haya estudiado la expresión de Selectina E en granuloma piógeno oral. Así, el objetivo de este trabajo fue analizar la expresión de esta molécula en muestras de pacientes con esta patología común.

Materiales y métodos

Muestras

Para la realización de este trabajo se seleccionaron 11 muestras de pacientes que asistieron a la Clínica de la Facultad de Odontología Mexicali y que fueron diagnosticados con granuloma piógeno oral en tejido gingival.  Se realizaron cortes seriados de 5 µm de las muestras incluidas en bloques de parafina, los cuales fueron desparafinados para llevar a cabo la tinción de Hematoxilina-eosina y realizar la confirmación histopatológica.

Inmunohistoquímica

Cortes seriados de 5 µm fueron colocados en laminillas electrocargadas (Fisher Scientific). Posteriormente, se realizó el desparafinado y después la rehidratación de los tejidos con PBS 1x, como ya se ha reportado previamente (Serafin-Higuera, Hernandez-Sanchez et al. 2012).  La técnica de marcaje por inmunohistoquímica fue llevada a cabo utilizando el sistema Mouse/Rabbit PolyDetector HRP/DAB Detection System (Bio SB, USA), siguiendo las indicaciones del fabricante y como se ha reportado previamente (Serafin-Higuera, Hernandez-Sanchez et al. 2012). Brevemente, las muestras fueron colocadas en buffer de citratos (ImmunoRetriever Citrate Solution, Bio SB) e incubadas en una olla de presión durante 5 minutos. Posteriormente, los tejidos fueron tratados con la solución PolyDetector Peroxidase Block quenching-buffer (Bio SB). Después de ser lavadas con PBS 1X, las muestras se incubaron con suero bovino al 1% durante 15 minutos. Se utilizó una dilución 1:100 del anticuerpo primario (E-Selectin, Santa Cruz Biotechnology) con un tiempo de incubación de 12-14 horas a 4°C. Se realizó una tinción de contraste con Hematoxilina y el montaje utilizando Permount-reagent (Fisher Scientific). Muestras en donde no se utilizó anticuerpo primario se incluyeron con controles de tinción negativos. Fotografías fueron obtenidas utilizando el sistema AxioCam ERc5s y el software ZEN 2012 (Carl Zeiss).

Resultados

La expresión de Selectina E fue analizada por inmunohistoquímica en muestras de pacientes diagnosticados clínicamente y corroborados por análisis histopatológico como granuloma piógeno. Los resultados mostraron señal positiva para Selectina E en 81.8% de las muestras analizadas.

Tinción con hematoxilina y eosina corroboro el diagnóstico clínico de granuloma piógeno (Ver Figura 1). Adicionalmente, una señal positiva débil para Selectina E fue observada en vasos de las muestras de granuloma piógeno (Ver Figura 2). Como puede ser observado, no todos los vasos mostraron señal positiva (Ver Figura 2).

Discusión y conclusión:

En el presente trabajo nosotros mostramos expresión de Selectina E en vasos sanguíneos de muestras de pacientes con granuloma piógeno oral. Como se explicó anteriormente, la expresión de Selectina E dio señal positiva en un gran porcentaje de las muestras y varias células inflamatorias se aprecian en las imágenes atravesando los vasos.

Este es el primer estudio donde se analiza la expresión por inmunohistoquímica de esta proteína en una lesión muy común en el área odontológica. Selectina E, es una proteína muy importante durante procesos inflamatorios, y es expresada en células endoteliales estimuladas, permitiendo la captura directa de leucocitos en vasos inflamados (Mondal, Stolfa et al. 2016).

La expresión observada en este trabajo de moléculas como la Selectina E en el granuloma piógeno, permitiría el ingreso de las células inflamatorias contribuyendo en las características clínicas de esta patología. Adicional a los factores angiogénicos, citocinas inflamatorias han sido implicadas en  la patogénesis de esta enfermedad (Yuan, Wing et al. 2002, Yuan and Lin 2004)  y ha sido observado que citocinas como interleucina beta o factor de necrosis tumoral alfa inducen la expresión de Selectina E (Zhong, Simoneau et al. 2017), así factores proinflamatorios presentes en microambiente del granuloma piógeno podrían inducir expresión de Selectina E. Finalmente, lo observado es este trabajo ayuda a entender mejor esta patología.

Figuras

Figura 1. Tinción con Hematoxilina-eosina mostro incrementada cantidad de vasos sanguíneos con abundantes eritrocitos e infiltrado inflamatorio. 100X.
Figura 1. Tinción con Hematoxilina-eosina mostro incrementada cantidad de vasos sanguíneos con abundantes eritrocitos e infiltrado inflamatorio. 100X.

 

Expresión de Selectina E (flechas) en vasos sanguíneos de muestras de pacientes con granuloma piógeno oral. A) 400X. B)1000X.
Expresión de Selectina E (flechas) en vasos sanguíneos de muestras de pacientes con granuloma piógeno oral. A) 400X. B)1000X.

Bibliografía

Godfraind, C., M. L. Calicchio and H. Kozakewich (2013). «Pyogenic granuloma, an impaired wound healing process, linked to vascular growth driven by FLT4 and the nitric oxide pathway.» Mod Pathol 26(2): 247-255.

Jafarzadeh, H., M. Sanatkhani and N. Mohtasham (2006). «Oral pyogenic granuloma: a review.» J Oral Sci 48(4): 167-175.

Lee, J., H. Sinno, Y. Tahiri and M. S. Gilardino (2011). «Treatment options for cutaneous pyogenic granulomas: a review.» J Plast Reconstr Aesthet Surg 64(9): 1216-1220.

Mondal, N., G. Stolfa, A. Antonopoulos, Y. Zhu, S. S. Wang, A. Buffone, Jr., G. E. Atilla-Gokcumen, S. M. Haslam, A. Dell and S. Neelamegham (2016). «Glycosphingolipids on Human Myeloid Cells Stabilize E-Selectin-Dependent Rolling in the Multistep Leukocyte Adhesion Cascade.» Arterioscler Thromb Vasc Biol 36(4): 718-727.

Pober, J. S. and W. C. Sessa (2007). «Evolving functions of endothelial cells in inflammation.» Nat Rev Immunol 7(10): 803-815.

Serafin-Higuera, N., J. Hernandez-Sanchez, R. Ocadiz-Delgado, J. Vazquez-Hernandez, M. E. Albino-Sanchez, R. Hernandez-Pando and P. Gariglio (2012). «Retinoic acid receptor beta deficiency reduces splenic dendritic cell population in a conditional mouse line.» Immunol Lett 146(1-2): 15-24.

Vassilopoulos, S. I., K. I. Tosios, V. G. Panis and J. A. Vrotsos (2011). «Endothelial cells of oral pyogenic granulomas express eNOS and CD105/endoglin: an immunohistochemical study.» J Oral Pathol Med 40(4): 345-351.

Vestweber, D. (2007). «Adhesion and signaling molecules controlling the transmigration of leukocytes through endothelium.» Immunol Rev 218: 178-196.

Waraasawapati, S., S. Koonmee, H. Kusama and M. Kudo (2013). «Extramedullary hematopoiesis in pyogenic granuloma.» Pathol Int 63(10): 492-495.

Yuan, K. and M. T. Lin (2004). «The roles of vascular endothelial growth factor and angiopoietin-2 in the regression of pregnancy pyogenic granuloma.» Oral Dis 10(3): 179-185.

Yuan, K., L. Y. Wing and M. T. Lin (2002). «Pathogenetic roles of angiogenic factors in pyogenic granulomas in pregnancy are modulated by female sex hormones.» J Periodontol 73(7): 701-708.

Zhong, L., B. Simoneau, J. Huot and M. J. Simard (2017). «p38 and JNK pathways control E-selectin-dependent extravasation of colon cancer cells by modulating miR-31 transcription.» Oncotarget 8(1): 1678-1687.