Comparacion de tres metodos para la determinacion de microalbuminuria
Autor: MSc. Vita Calzolaio | Publicado:  30/05/2011 | Analisis Clinicos , Nefrologia , Articulos | |
Comparacion de tres metodos para la determinacion de microalbuminuria .1

Comparación de tres métodos para la determinación de microalbuminuria.

MSc. Vita Calzolaio. Dpto. Ciencias Morfológicas y Forenses de la Universidad de Carabobo. Escuela de Ciencias Biomédicas y Tecnológicas. Profesora Instructor
MSc. Amarily Perelli. Dpto. de Formación Integral del Hombre. Facultad de Odontología. Universidad de Carabobo. Profesora Instructor
Dra. Emy González. Investigadora del Laboratorio de Investigación y Postgrado de la Escuela de Bioanálisis-sede Valencia. Universidad de Carabobo.
Dra. Rosalina González. Dpto. de Investigación y Desarrollo Profesional. Escuela de Bioanálisis-sede Carabobo. Universidad de Carabobo. Profesora Titular
Lic. Alastre Daniela. Licenciada en Bioanálisis egresada de La Universidad de Carabobo
Lic. Anhil Angulo. Licenciada en Bioanálisis egresada de La Universidad de Carabobo
Lic. Tamara Aranguiz. Licenciada en Bioanálisis egresada de La Universidad de Carabobo

Resumen:

La microalbuminuria se define como una pequeña cantidad de proteína (albúmina) presente en la orina, en cantidades no evidenciables por los métodos tradicionales utilizados en el laboratorio, lo que hace imposible su captación a través de dichos procedimientos. La cuantificación de ésta es fundamental en el diagnóstico y seguimiento de las patologías renales. El objetivo de este estudio fue comparar tres métodos: la cinta reactiva, el método inmunoturbidimétrico y el método inmunológico de fase sólida (Nycocard), utilizando concentraciones conocidas para evidenciar cuál de éstos produce resultados reproducibles, exactos y fiables. La población y muestra estuvo conformada por patrones elaborados a partir de una solución madre de albúmina de 20g%.

Se prepararon patrones de 3, 7, 10, 15, 25, 50, 75, 100, 125 y 150 mg/L. La ejecución del método inmunoturbidimétrico, se realizó siguiendo el protocolo indicado en el inserto del kit Spinread, cuya lectura se realizó en un Stat fax Milleniun III a la longitud de onda indicada. Todos los patrones se midieron con la cinta reactiva Micraltest, comparando el color obtenido con la cartilla de colores provista por el producto, cuyas concentraciones son 20, 50 y 100 mg/L. Por último se realizaron las determinaciones con el método inmunológico en fase sólida de tipo sándwich los cuales fueron medidos en el densitómetro fotocolorímetro Nycocard Reader II. Encontrando que, la cinta reactiva Micraltest resultó altamente sensible en la detección de microalbuminuria, aunque es un método sencillo de bajo costo, los resultados deben ser confirmados por los métodos cuantitativos. El método inmunoturbidimétrico evidenció ser una prueba adecuada para el diagnóstico y cuantificación de la microalbuminuria, sin embargo, el método Nycocard es la técnica que mostró resultados reproducibles con mayor precisión y exactitud en cuanto a las concentraciones de los patrones medidos.

Palabras clave: Microalbuminuria, Patrones, Inmunoturbidimetría, Cintas Micraltest, Elisa fase sólida.

Abstract:

Microalbuminuria was defined as a small amount of protein (albumin) in urine in quantities not warranted by the traditional methods used in the laboratory, making it impossible to capture through the procedures. Its assessment is essential in the diagnosis and monitoring of renal pathology. The aim of this study was to compare three methods: the tape strip, the immunoturbidimetric method and solid phase immunological method (NycoCard) using known concentrations to demonstrate which of these produces reproducible, accurate and reliable. The population and sample consisted of patterns made from a stock solution of 20 g% albumin.

Patterns were prepared 3, 7, 10, 15, 25, 50, 75, 100, 125 and 150 mg/L. Immunoturbidimetric method execution was carried out following the protocol described in the kit insert Spinrad, whose reading was performed on a Stat Fax Milleniun III to the wavelength indicated. All patterns were measured with reactive Micraltest tape, obtained by comparing the color with the color chart provided by the product, whose concentrations are 20, 50 and 100 mg/L. Finally, we performed the measurements with the immunological method solid phase sandwich which were measured on the densitometer photocolorimeter NycoCard Reader II.

Finding that the tape was highly sensitive Micraltest reactive in the detection of microalbuminuria, while a simple low-cost method, the results must be confirmed by quantitative methods. Immunoturbidimetric method showed to be an appropriate test for the diagnosis and quantification of microalbuminuria, however, the method is the technique NycoCard showed reproducible results with greater precision and accuracy in the measured concentrations of the standards

Palabras clave: Microalbuminuria, Patterns, immunoturbidimetric, Micraltest Tape, Elisa solid phase

Introducción

La enfermedad renal ha adquirido en los últimos años las proporciones de una verdadera epidemia. Conforme avanza la enfermedad la capacidad filtradora del riñón disminuye, aunque durante la mayor parte de la enfermedad el paciente no presenta síntomas de daño renal, existe sin embargo una proteinuria que no es evidenciable por los métodos tradicionales de laboratorio, y es precisamente la medida de esta pequeña cantidad de proteínas lo que permite evaluar la extensión de la lesión del riñón.

La microalbuminuria se define como una pequeña cantidad de proteína (albúmina) presente en la orina, en una concentración de 30 a 300mg/24 horas, la cual es inferior a la cuantía detectada por los métodos utilizados para la determinación de proteínas en orina, lo que hace imposible su captación a través de dichos procedimientos. La presencia de una proteinuria importante es el resultado de un aumento de la permeabilidad glomerular y por consiguiente signo de enfermedad renal en donde el grado de excreción proteica se relaciona con la progresión de la misma.

Este parámetro le permite al nefrólogo diagnosticar en forma temprana la presencia de daño renal y poder revertir el proceso, ya que en este rango de excreción esta patología es potencialmente reversible si se toman las medidas adecuadas. (1,2).

La microalbuminuria es un marcador de enfermedad sistémica y un índice temprano de la alteración glomerular. Se le ha asociado con trastornos renales y cardiovasculares, disfunciones a nivel endotelial, dislipidemias, hipertensión arterial sistémica, hepatopatías, nefropatía y síndrome metabólico. (3). A pesar de esto, existen otras condiciones que pueden producir microalbuminuria transitoria, como el ejercicio intenso, las infecciones de las vías urinarias, las enfermedades febriles agudas, la menstruación, la variabilidad biológica, los fármacos antiinflamatorios y los cálculos renales. (4,5).

En vista de esto, la cuantificación de microalbuminuria es fundamental en el diagnóstico y seguimiento de las patologías mencionadas. Esta debe realizarse anualmente a todas las personas que presenten estas patologías y cada 6 meses a aquellos pacientes con tratamiento antihipertensivo durante el primer año de tratamiento para evaluar el impacto.

En la actualidad, existen en el mercado diferentes métodos para la detección de la microalbuminuria, siendo su determinación en el laboratorio un proceso simple, a través del cual se puede obtener en pocos minutos un resultado. Estos resultados obtenidos van a influir decisivamente en el diagnóstico y tratamiento médico, por lo que la calidad de la información generada debe ser un objetivo prioritario y se basa en la calidad del trabajo analítico. Entre los métodos de laboratorio que permiten su determinación se pueden mencionar: los cualitativos en los que se emplean las cintas reactivas y los valores obtenidos son reportados como positivos o negativos; los semicuantitativos, en el que los resultados obtenidos son comparados con una escala de color que representan determinadas concentraciones y los cuantitativos en donde se utilizan un reactivo especifico obteniéndose concentraciones determinadas que varían según la técnica empleada. (6).

Diversos autores han puesto su mirada en el comportamiento de los métodos que permiten la determinación de la microalbuminuria, es así como en el año 1992, Marshall y col., evaluaron las cintas Micral-Test en muestras de orinas matutinas en la escuela de Medicina de Framlington Reino Unido, las cuales contenían concentraciones de albúmina entre 0,4-440 mg/L determinadas por radioinmunoanálisis. Las muestras provenían de 112 pacientes diabéticos. De éstas, sólo 34 mostraron concentraciones ≥ 20 mg/L y 78 con concentraciones < 20mg/L. Estas fueron correctamente identificadas por la cinta dando un 100% de sensibilidad y 91% de especificidad, concluyendo que la cinta es sensible y específica para la determinación semicuantitativa de albúmina. Pero en aquellos pacientes con concentraciones < 20 mg /L solo requieren la repetición de la prueba anualmente; al contrario, los pacientes con concentraciones ≥ 20mg / L requieren otras pruebas que cuantifiquen la tasa de excreción de albúmina. De igual forma concluyeron que el tiempo de lectura es crítico para la estimación de la concentración del parámetro, ya que las cintas leídas después de 4-5 minutos mostraron una sobreestimación del parámetro.(7)

En 1993, Jensen y col. evaluaron el desempeño de la cinta reactiva Micral Test validando los resultados obtenidos con el método ELISA, en 1359 muestras de pacientes que asistían al Steno Diabetes Center, de Gentofte, Dinamarca. La sensibilidad, especificidad y especificidad diagnóstica obtenida con la cinta fue de 92, 58 y 12% respectivamente. En conclusión, la cinta resultó altamente sensible en la detección de microalbuminuria a pesar del alto número de falsos positivos obtenidos cuando se le comparó con el método de ELISA. (8)

También en 1998, Solanas y col. en el Centro de Salud Trinitat de Valencia, España, evaluaron los métodos para la determinación de microalbuminuria en 64 muestras de pacientes con diabetes mellitus no insulino dependientes. Para esto, se realizó la determinación de microalbuminuria a través de las cintas reactivas Micral Test y Microbumintest en muestras de orina matutina, corroborando los resultados conseguidos con las cintas con el método inmunoturbidimétrico. Utilizadas en conjunto, las cintas obtuvieron una sensibilidad del 75% y una especificidad del 44% cuando se les comparó con el método inmunoturbidimétrico, concluyendo que los métodos semicuantitativos para microalbuminuria, como estas cintas, tienen un uso limitado en atención primaria debido a que su sensibilidad y su valor predictivo de resultados negativos no son aceptables como método de diagnóstico inicial. (9)

Seis años más tarde, en el 2004, en el Hospital Regional de LaPorte, USA, Busby y col. realizaron una comparación entre la cinta reactiva y los métodos que utilizan la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) en pacientes con enfermedad renal, concluyendo que estas nuevas metodologías son muy sensibles para la detección de este parámetro y proveen información de mucha utilidad para la identificación de pacientes de alto riesgo. Sin embargo, concluyeron que la cinta reactiva presenta la ventaja de permitir el diagnóstico de dichos pacientes de una manera rápida debido a que no es un método tan complejo para desarrollar como la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). (10)



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