Desarrollo.

El género Neisseria comprende 12 especies y biovariedades aisladas en humanos. En la novena edición del Manual Bergey solo se reconocen 11 especies, sin tener en cuenta la Neisseria polisaschareae descrita por Riou en 1983. (10,11)

Especies patógenas

Neisseria meningitidis

Neisseria gonorrhoeae

Especies no patógenas

Neisseria sicca

Neisseria mucosa

Neisseria subflava: biovariedades Neisseria flava, Neisseria subflava, Neisseria perflava

Neisseria canis

Neisseria lactamica

Neisseria flavescens

Neisseria cinerea

Neisseria elongata

Neisseria dentrificans

Características morfológicas y fisiológicas.

El género Neisseria es el más importante en la familia Neisseriaceae, son cocos de 0,6-1,0 mm de diámetro que se presentan aislados o más frecuentemente en pares con los lados adyacentes aplanados. La especie Neisseria elongata es una excepción y se presenta como bacilos cortos de 0,5 mm a menudo agrupados como diplobacilos o en cadenas cortas. La división de las especies cócicas es en dos planos en ángulo recto uno del otro dando como resultado a veces tétradas. Pueden presentar cápsulas y fimbrias (pili), no poseen endosporas y aunque son gramnegativas tienen tendencia a resistir la decoloración de Gram. Los flagelos están ausentes y no hay motilidad. (12)

Las especies patógenas (Neisseria meningitidis, Neisseria gonorrhoeae) son muy exigentes en sus requerimientos nutricionales y para iniciar su desarrollo precisan medio enriquecido, una humedad relativa elevada y atmósfera con un 5-10% de CO₂. Para evitar la acción inhibidora de los ácidos grasos libres contenidos en el medio (peptona y agar) se deben añadir sustancias protectoras como sueros, albúmina y almidón, en estas condiciones se desarrollan dentro de estrechos límites de temperatura entre 35 y 37°C y un pH entre 7,2 y 7,6. Son muy sensibles a la acción de los agentes externos (desecación, temperaturas extremas, antisépticos y desinfectantes). Las colonias con el tiempo sufren un proceso de autolisis que se puede evitar por la adición de cationes divalentes (Ca++, Mg++). (13,14)

En medio sólido el meningococo crece como una colonia transparente, no pigmentada, no hemolítica, de un diámetro aproximado de 1-5 mm. Las colonias son convexas y si se presentan grandes cantidades de polisacáridos tendrán una apariencia mucoide. El meningococo crecerá bien en bases de agar sangre, GC y medios como tripticasa-soja, agar chocolate y agar de Müeller Hinton con suplemento enriquecedor. (15)

Caracterización de cepas de Neisseria meningitidis.

La caracterización de cepas de Neisseria meningitidis nos ayuda a establecer diferencias entre cepas que están estrechamente relacionadas dentro de una misma especie. Esta condición nos propicia el establecimiento de asociaciones de determinada cepa tipo con fenómenos clínicos epidemiológicos por lo que constituye una útil herramienta en la vigilancia epidemiológica, para la comprensión de la patogenia de la enfermedad meningocócica, y en los estudios preliminares y de evaluación de vacunas. (16)

Métodos fenotípicos.

Desde principios del siglo XX ha sido un tema de estudio la diferenciación de cepas de Neisseria meningitidis basándose en la composición inmunoquímica del polisacárido capsular.

En la actualidad son reconocidos 13 serogrupos, aunque realmente se plantea la existencia de 12 pues como el D perdió su cápsula pasó a ser no seroagrupable. Hasta la década del 60 los estudios epidemiológicos se basaron solo en la caracterización de serogrupos aislados de enfermos y portadores. (17,18)

Los estudios relacionados con la caracterización de cepas por medio de pruebas de susceptibilidad antimicrobiana (PSA), se inician bajo el nombre de “Pruebas in vitro de la actividad antimicrobiana en bacterias” y con el documento referido al descubrimiento de la Penicilina en 1920 por Alexander Fleming (60). Jackson y Finland fueron los primeros en mostrar la importancia de la estructuración fundamental de una prueba con relación al tamaño del inoculo, duración de la incubación y el punto final para la determinación cualitativa de la susceptibilidad. No fue hasta 1960 que Bauer y colaboradores realizan un trabajo significativo donde se acordaban las condiciones de estandarización que recibe el nombre de disco de difusión de Bauer–Kirby en su honor. Este método solo fue útil para bacterias que crecían rápido en atmósfera aerobia. (19,20)

Con la continuación de éste y otros estudios se deja ya establecida la PSA con difusión en disco y la PSA con dilución en agar, siendo el método de dilución en placa de agar la técnica de preferencia para Neisseria, sobre la base de la determinación de la concentración inhibitoria mínima (CIM) la cual definimos como la menor concentración del antimicrobiano que es capaz de inhibir el crecimiento del microorganismo. (21,22)

Mediante técnicas como la Electroforesis en Gel de Poliacrilamida (SDS-PAGE) se observó que la membrana externa del meningococo contenía varias proteínas principales, las cuales fueron agrupadas por su peso molecular mediante la técnica de mapeo peptídico tridimensional en 5 clases estructurales designadas con números arábigos del 1 al 5. (23)

En 1985 Frasch propuso una nomenclatura que fuera uniforme teniendo en cuenta los siguientes elementos; utilizó un esquema semejante al O: K: H empleado para Escherichia coli por lo que quedó de la siguiente forma. (24)

Serogrupo PC

Serotipo Proteína 2/3

Subtipo Proteína 1

Inmunotipo LPS

Ejemplo Cepa B: 4:P1.15.19:L3,7.9.

En la actualidad se conocen 22 tipos bien definidos de meningococo y aún permanecen alrededor de un 30% de cepas que no son tipables por el método de SDS-PAGE. (25)

Abdillahi y Poolman emplearon el ensayo inmunoenzimático de células completas (ELISA) con AcM para tipar y subtipar cepas de meningococo. Sin embargo algunos meningococos no reaccionaron con los diferentes grupos de AcM y fueron denominados no subtipables. (26)

La especificidad del serotipaje con AcM específicos está entre el 72 y el 100% y el sero-subtipaje muestra valores entre el 64 y el 98%. Su uso nos brinda la posibilidad de eliminar posibles reacciones cruzadas y con ello ha aumentado la precisión del serotipaje del meningococo. Sin embargo se presentan falsos negativos ya que algunos AcM no son muy sensibles. (27)