Caso clínico. Bacteriemia por Psychrobacter spp. en un paciente oncológico

T. García-Lozano (1), E. Aznar Oroval (1), J. L. Juán Bayón (3), A. Guerrero Zotano (2), E. Esteban Bermúdez (3)

1. Laboratorio de Análisis Clínicos y Microbiología, Fundación Instituto Valenciano de Oncología
2. Servicio de Oncología Médica, Fundación Instituto Valenciano de Oncología
3. Instituto Valenciano de Microbiología, España

Agradecimientos:

Dr. J. Maiques Richart †
Ignacio Guillén Bernardo

Caso clínico: Bacteriemia por Psychrobacter spp. en un paciente oncológico.

Bacteremia caused by Psychrobacter spp. in a cancer patient.

Resumen:

Introducción: Presentamos un caso de bacteriemia por Psychrobacter spp. en una paciente con cáncer de mama en tratamiento.

Material y métodos: se realizaron estudios microbiológicos habituales, PCR y secuenciación.

Resultados: la secuencia en la base de datos del NCBI usando el algoritmo blast-n fue de Psychrobacter spp. con referencia en genbank HM584480.1 y un porcentaje de similitud con secuencias de la misma especie en genbank del 98%, con mayor homología entre Psychrobacter faecalis y Psychrobacter pulmonis.

Conclusiones: primera, la escasa frecuencia de aislamientos por Psychrobacter spp., segunda, la presencia de un aislamiento atípico como el descrito, en un enfermo con patología de base tumoral y tercera, la escasa afectación sistémica de nuestra paciente, seguramente debido al elevado número de neutrófilos presentados durante la bacteriemia.

Abstract:

Introduction: let's sense beforehand a case of bacteremia for Psychrobacter spp. in a patient with cancer of breast in treatment.

Material and methods: there were realized microbiological habitual studies, PCR and sequencing.

Results: the sequence in the database of the NCBI using the algorithm blast-n it was of Psychrobacter spp. with reference in genbank HM584480.1, and a GenBank 98% similarity rate in sequences of the same species, being most homologous with P. faecalis or P. pulmonis.

Conclusions: first, the limited Psychrobacter spp. Isolations, second, the presence of an atypical isolation as described in a sick patient with a tumor-based pathology; and third, the limited systemic effects experienced by the patient, most certainly due to the heightened level of neutrophils present during the bacteremia.

Palabras clave: Bacteriemia; Psychrobacter spp.; paciente oncológico; PCR; secuenciación

Keywords: Bacteremia; Psychrobacter spp.; cancer patient; PCR; sequencing

Presentamos una bacteriemia por Psychrobacter spp. en un paciente oncológico, séptico y con afectación sistémica que evoluciona favorablemente.

CASO CLÍNICO

Paciente mujer de 43 años, obesa, exfumadora, diagnosticada de cáncer de mama localmente avanzado, receptores hormonales negativos y HER2 positivo, que inició tratamiento quimioterápico preoperatorio en Julio del 2010 con Antraciclinas, Paclitaxel y Trastuzumab. En Agosto del mismo año, acudió a urgencias por un cuadro febril de 39º C, sin foco filiado y estado general conservado, tras el último ciclo de quimioterapia con factores estimulantes de colonias granulocíticas (G-CSF). De las pruebas complementarias destacó una leucocitosis de 22.3 x 109/L, hemoglobina 123 g/L, plaquetas 269 x109/L neutrófilos 19 x109/L, LDH de 560 U/L, función renal normal y radiología de tórax sin hallazgos de interés. Se obtuvieron hemocultivos y se inició antibioterapia empírica con amoxicilina-ácido clavulánico 500/125 mg cada 8 horas.

A las 48 horas se detectaron 2 hemocultivos positivos, de dos venopunciones diferentes, informándose desde el laboratorio de microbiología como formas bacilares gramnegativas. Tras los resultados, se decide mantener el tratamiento antimicrobiano hasta los 7 días, quedando apirética a las 48 horas. En cuanto a los aspectos epidemiológicos, niega ingesta de marisco, viajes exóticos, pero refiere poseer un conejo de indias.

Su detección inicial fue en hemocultivos mediante el sistema de lectura automatizado BACTEC® 9050 (Becton Dickinson), tinción de Gram, subcultivos en agar chocolate (BD), agar MacConkey (BD) y agar sangre con ácido nalidíxico (BD). Se procesaron las pruebas de sensibilidad mediante el método de difusión disco-placa Kirby-bauer en Mueller-Hinton (BD) según las normas CLSI (Clinical Laboratory Standards Institute).

Su identificación se procesó mediante pruebas bioquímicas manuales y sistema comercial Api 20NE® (bioMérieux), no siendo concluyentes. Se optó a la utilización de métodos semiautomáticos MicroScan® de Siemens, sin obtener resultados definitivos. Las características bioquímicas más relevantes de nuestro estudio fueron: presencia de crecimiento a las 48 horas de colonias pequeñas, redondeadas, bien definidas en agar MacConkey y agar chocolate, ausencia de crecimiento en bilis e hidrólisis de la esculina positivo débil, oxidasa positivo, ureasa positivo y actividad nitratasa positivo (NO2 positivo).

Ante la imposibilidad de obtener un resultado fiable, se decide remitir la cepa en agar sangre Trypticase para su secuenciación en el Instituto Valenciano de Microbiología (IVAMI).

Su identificación se llevó a cabo mediante PCR simple y secuenciación. Se empleó 100 ng de ADN para la amplificación en un volumen final de 50 µL con 2 mM de MgCl2, 10 mM Tris HCL, 50 mM KCL, 0,1% tritón X-100, 0,5 mM de cada uno de los dNTPs (Promega®), 0,5 M de cada cebador y 4 U Taqpolimerasa (Promega®), con 35 ciclos de amplificación de 94º C de desnaturalización (1 minuto), 45º C de apareamiento (1 minuto) y 72º C de extensión (2 minutos). Los cebadores utilizados en la primera amplificación para este tipo de bacterias corresponden a las posiciones 4 a 21 (iniciador cadena directa) y 1381 a 1362 (iniciador cadena complementaria).

La detección del amplificado de 1378 pares de bases se realizó en gel de agarosa al 3%. El amplificado fue purificado mediante columnas (Quiagen®). La reacción de secuenciación se llevó a cabo en un volumen final de 10µL mediante BigDye Terminador v3.1 Cycle sequencing kit® en las condiciones descritas por el fabricante. El perfil de amplificación empleado fue 25 ciclos con 10 segundos a 94º C, 10 minutos a 50º C y 4 minutos a 60º C. Una vez finalizada la reacción de secuenciación, fue purificada mediante alcoholes (etanol al 100% y al 70%) y resuspendiendo el producto final en formamida desionizada. El producto final fue secuenciado en ABI PRISM® 310 (Applied Biosystems) y analizada la secuencia en la base de datos del NCBI usando el algoritmo blast-n. La numeración empleada en la posición de los cebadores corresponde a la secuencia de Psychrobacter spp. con referencia en genbank HM584480.1, con un porcentaje de similitud con secuencias de la misma especie en genbank del 98%, con mayor homología entre Psychrobacter faecalis y Psychrobacter pulmonis.

El estudio de sensibilidad resultó sensible a todos los betalactámicos, macrólidos, aminoglucósidos y quinolonas, mediante el método de difusión Kirby-bauer con disco-placa en Mueller-Hinton (bioMérieux®) a 37º C y lectura a las 24 horas según los puntos de corte y recomendaciones del CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) para bacilos gramnegativos no fermentadores.

El género Psychrobacter spp. pertenece a la clase Zymobacteria, Orden VIII Pseudomonadaceae, familia Moraxellaceae que se presenta como cocobacilo o bacilo gramnegativo pleomórfico de forma ovalada que varía en longitud y forma bacilar corta o relativamente larga. No son formadores de esporas, no encapsulados, inmóviles y anaerobios facultativos. Está muy relacionado con Moraxella, Acinetobacter y por ello se incluyen en la misma familia Moraxellaceae. Sus propiedades bioquímicas más relevantes son: inmóvil, catalasa positivo, oxidasa positivo, reduce los nitritos a nitratos, no hidrolizan la esculina, desdobla la urea, desamina el triptófano, su metabolismo es oxidativo y la producción de pirrolidonil-arilamidasa (PYR) es negativa (1).

Su temperatura óptima de crecimiento es de 20-25º C (cepas psicotróficas) capaces de crecer a 5-20ºC y no a 35-37ºC (6). Se han aislado en animales, en pescado fresco (3), en humanos con cirrosis hepática tras la ingestión de moluscos frescos (4), en pacientes sometidos a cirugías agresivas (8) y en meningitis (5).

Se clasifican en 5 especies: Psychrobacter frigidicola, Psychrobacter glacincola, Psychrobacter immobilis, Psychrobacter phenylpyruvicus y Psychrobacter urativorans (6), aunque se han descrito más de 30 especies en la naturaleza y varias publicaciones en humanos, entre ellas, infecciones oculares (2), meningitis por Psychrobacter immobilis (5) y artritis séptica por Psychrobacter phenylpiruvicus (7).