DISEÑO METODOLÓGICO

Se realizó investigación epidemiológica descriptiva de corte transversal, cuya población de estudio estuvo conformada por 2.324 ciudadanos habitantes de las seis localidades seleccionadas del Municipio Roscio del estado Guárico. El área de estudio, presentan características de zona rural, con clima tropical de sabana caracterizado por dos períodos estacionales (Época Seca y Época Lluviosa); con temperatura media oscilante entre 24°C y 26°C con máxima de 38°C y una mínima de 11°C.

Se obtuvo un tamaño de muestra de 144 personas, utilizando la formula de estimación de una proporción (15), considerando 10% de prevalencia para la enfermedad de Chagas y 95% de confianza. Cuya expresión es la siguiente:

N ₌ (Z^2 x P x Q) / d2


Donde:
N ₌ Tamaño de la Muestra.
Z2₌ Valor de Z al cuadrado (constante a 95%).
P = 0,1 (proporción esperada en este caso 10% = 0,1)
Q = 1- p = 0.9

Bajo el modelo completamente aleatorizado, previo información de la importancia del estudio y solicitud del consentimiento informado para su participación, se aplicaron 73 encuestas considerando la distribución proporcional por localidad, y participaron voluntariamente 163 personas en el despistaje serológico.

Se establece como criterio de inclusión para la toma de muestra sanguínea a toda persona mayor de un año y que haya vivido más de tres meses en la localidad objeto de estudio; así como todos los habitantes que se encontraba en su vivienda al momento de la visita y para la encuesta a todo individuo mayor de edad que represente a la familia (Madre, padre u otro).

Se aplico la encuesta utilizada por el Centro de Investigaciones De Las Enfermedades Tropicales “José Francisco Torrealba”, en el proyecto N° 490088008; con la finalidad de registrar las características demográficas de la población categorizándola por sexo, edad y recopilar información sobre algunos hábitos de interés; ocupación, características de la vivienda, servicios básicos con que cuentan, para determinar los factores asociados que pudieran ser influyentes para la presencia de la Tripanosomiasis Americana.

Mediante venopunción de la región antecubital, de la vena básica o cefálica se extrajeron 6 mL de sangre. Posteriormente, en el laboratorio fueron centrifugadas a 2.500 rpm durante 10 minutos, para separar los elementos formes de la sangre del suero y se almacenaron 3 alícuotas de 1,5 mL, las cuales fueron congeladas a – 20 ºC, hasta el momento de su procesamiento.

Inmunodiagnóstico

A cada una de las muestras de sueros se le realizó dos técnicas diagnósticas; Hemaglutinación Indirecta (HAI) y ELISA.

Determinación Serológicas de Anticuerpos contra Trypanosoma cruzi, por el test ELISA para Chagas III de BiosChile

Se realizó análisis serológico de anticuerpos contra Trypanosoma cruzi, por la técnica de ELISA modalidad indirecto, cuyo fundamento “reacción inmunoenzimático en fase sólida para la detección cualitativa de anticuerpos contra Trypanosoma cruzi. Se realiza en placas cuyos pocillos han sido activados con extractos totales de las cepas de Trypanosoma cruzi Tulahuén y Mn, incluyendo antígenos de membrana altamente inmunogénicos. El recubrimiento de los pocillos se realiza mediante una novedosa tecnología consistente en la utilización de un adhesivo biológico que facilita la inmovilización de los antígenos y aumenta la estabilidad de la placa activada. Si las muestras analizadas contienen anticuerpos específicos para Trypanosoma cruzi, éstos formarán un complejo estable con los antígenos que recubren los pocillos. El material unido en forma inespecífica será eliminado por medio del lavado. Durante la incubación con el conjugado, los anticuerpos anti-IgG humanos marcados con peroxidasa se unirán al complejo formado. Finalmente, en la etapa de incubación con el sustrato cromogénico, la peroxidasa unida al complejo producirá una coloración que permitirá detectar las muestras reactivas para Trypanosoma cruzi. La reacción enzimática se detendrá por la adición de ácido sulfúrico, midiéndose luego la intensidad del color en un lector colorimétrico para placas de ELISA”.

Para la lectura se calculó el valor de «cut off» a partir del promedio de los valores de absorbancia correspondientes a los controles positivos y negativos; multiplicado por la constante 0,35. La muestra se consideró positiva cuando su absorbancia sea mayor que el «cut off». Un suero, negativo cuando su absorbancia sea menor que el «cut off». Las muestras cuya absorbancia se encuentre en un rango de «cut off» ± 10%, fueron consideradas dudosas.


Determinación Serológicas de Anticuerpos contra Trypanosoma cruzi, por el Chagastest por hemaglutinación Indirecta (HAI) de Wiener laboratorio

Se realizó análisis serológico de anticuerpos contra Trypanosoma cruzi, por la técnica de la hemaglutinación indirecta (HAI), también llamada hemaglutinación reversa pasiva, se basa en la propiedad que tienen los anticuerpos (que en este caso son anti-Trypanosoma cruzi) de producir aglutinación específica en presencia de glóbulos rojos sensibilizados con los correspondientes antígenos. En el suero existen anticuerpos inespecíficos (heterófilos) que son capaces de aglutinar glóbulos rojos de distintas especies. Su presencia se investiga enfrentando el suero con Glóbulos Rojos no sensibilizados. Los anticuerpos interferentes se eliminan mediante tratamiento con 2-mercaptoetanol.

Se consideró reactiva las muestras que presenten reacción en diluciones mayor o igual a 1/32; de lo contrario será interpretó como no reactiva.

Tomando en consideración los criterios establecidos por la OMS (1991); las muestreas con presencia de Anticuerpos anti -Trypanosoma cruzi en las dos técnicas serológicas empleadas con diferentes fundamentos se califico como Reactiva. Opuesto a lo anterior, una muestra es No Reactivo cuando no mostraron reacción al ser tratada con antígenos de Trypanosoma cruzi. Mientras que aquellas muestras con resultado positivo por una sola técnica utilizada se interpreto como dudosa.

Estudio entomológico.

La recolección de los triatominos, fue realizada por los habitantes de las viviendas visitadas, a quienes se le mostraron ejemplares adultos y ninfas en los diferentes estadios de las principales especies involucrados en la transmisión de Chagas, como son R. prolixus, Triatoma maculata y Panstrongylus geniculatus, de igual manera se les recomendó guardar otros insectos parecidos encontrados en sus viviendas durante el período de 15 días (16). Para esto, se le proporcionó dos recipientes de plástico, debidamente rotulado, con el número de la vivienda, nombre del jefe de familia, además de una pinza blanda, improvisada con un gancho para carpeta doblada por la mitad, para evitar el contacto directo con los insectos.

Los datos fueron tabulados en hoja de cálculo con la ayuda del Programa Microsoft Office Excel 2007 y mediante el empleo del programa computarizado EPI INFO 3.5.1. Se estimo la significancia estadística y la asociación entre las variables utilizando el estadístico X2 con la corrección de Yates, considerando un p< 0,05 como significativo el análisis de las variables se realizó con el empleo de la estadística descriptiva.

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

En el estudio seroepidemiológico a Trypanosoma cruzi, la prevalencia global fue de 6,14% (10/163) (Cuadro 1), como se observa la localidad que obtuvo menor reactividad es Cumbre 3,33% (2/60) y con mayor Los Robles 14,29% (2/14) seguido por Las Callecitas-El Castrero 9,09% (4/44).

Cuadro 1. Seroprevalencia por localidad en el municipio Roscio del estado Guárico 2008.