Enfermedad veno-oclusiva hepática (EVOH) en ratas tras administración de busulfán.

Navarro Moreno MA, Moreno Gálvez A. Dpto. de Ciencias Experimentales y Matemáticas, Facultad de Ciencias Experimentales, Universidad Católica de Valencia San Vicente Mártir, Valencia (Spain).

Dra. Mª Ángeles Navarro Moreno. Dpto. de Ciencias Experimentales y Matemáticas. Facultad de Ciencias Experimentales, Universidad Católica de Valencia San Vicente Mártir, Valencia (Spain).

Resumen

A menudo se relaciona la aparición de la enfermedad veno oclusiva hepática con la administración de busulfán como parte del régimen preparativo para el trasplante de médula ósea, con una menor incidencia de la enfermedad en niños que en adultos. Los intentos de reproducir la enfermedad veno oclusiva hepática en la rata tras la administración de dosis altas de busulfán fracasaron, por lo que no se pudo demostrar la correlación anterior, sugiriendo que la administración del busulfán no es la única causa que provoca la aparición de la enfermedad.

Palabras Clave: Enfermedad veno-oclusiva hepática, ratas, busulfán

Introducción

El busulfán es un antineoplásico sintético perteneciente al grupo de los agentes alquilantes, que presenta 4 grupos metileno entre dos grupos metil-sulfonato:

H3C-SO2-O-CH2-CH2-CH2-CH2-O-SO2-CH3

Diferentes autores han atribuido la aparición de la enfermedad veno oclusiva hepática (EVOH) a la administración de altas dosis de busulfán como parte del régimen preparativo para el trasplante de médula ósea 1-5.

El régimen pretrasplante seguido actualmente en clínica consta de la administración de busulfán durante 4 días consecutivos (4 mg/Kg/día) seguido de ciclofosfamida durante el mismo número de días (50 mg/Kg/día). El noveno día tiene lugar el trasplante de médula ósea y la disfunción hepática aparece a los 21 días 6. Como se sabe, la quimioterapia del busulfán es mielosupresiva, mientras que la de la ciclofosfamida es inmunosupresiva 7. El orden de la administración de estos dos antineoplásicos en el régimen pretrasplante se debe a que el individuo tiene que estar el mínimo tiempo posible inmunodeprimido.

De entre la bibliografía disponible, únicamente se ha observado la enfermedad veno oclusiva hepática (EVOH) en tratamientos con busulfán y con la combinación de busulfán y ciclofosfamida 1.

Mientras que para algunos autores los parámetros farmacocinéticos del busulfán no se relacionan con la aparición de enfermedad veno oclusiva hepática (EVOH) 1,8, otros detectan ciertas correlaciones de la enfermedad con determinados parámetros 1,4. En este sentido, Grochow y col. 4 observaron la correlación con bajos valores del aclaramiento plasmático. Posteriormente, los mismos autores 1 relacionaron la enfermedad con elevados valores de AUC del antineoplásico.

Según este último grupo de autores, es conveniente la monitorización de los niveles plasmáticos del busulfán y el cálculo de los parámetros farmacocinéticos para determinar la dosis óptima y así conseguir una mejor eficacia y una menor incidencia de enfermedad veno oclusiva hepática (EVOH).

Las discrepancias entre los trabajos consultados acerca de la relación entre niveles de busulfán y el desarrollo de enfermedad veno oclusiva hepática (EVOH) nos llevaron a intentar reproducir la enfermedad en la rata para establecer la posible relación entre los parámetros cinéticos del busulfán y la enfermedad veno oclusiva hepática (EVOH).

Material y métodos

Se ensayaron varias pautas posológicas con el fin de reproducir dicha enfermedad en la rata. La metódica de trabajo fue la siguiente: finalizado el régimen posológico determinado, se procedió a la anestesia del animal con éter etílico y se sometió a la perfusión con una solución fijadora como se detallará más adelante. Posteriormente se seccionó el hígado, se lavó con alcoholes de distinta graduación y se incluyó en parafina. A continuación, se realizaron cortes histológicos con un microtomo para su posterior coloración y observación en el microscopio.

Administración de una dosis de uretano al 10 % por vía intraperitoneal. Grupo 1.

La administración intraperitoneal de uretano en la rata provoca la aparición de la enfermedad veno-oclusiva hepática. Por ello, con el fin de caracterizar histológicamente la enfermedad en nuestras condiciones experimentales, se procedió a la administración de distintas dosis de uretano a diferentes grupos de animales:

- 2 animales recibieron una inyección intraperitoneal de 5 ml de uretano al 10 %, los cuales murieron un minuto después de la administración.

- 2 animales recibieron una inyección intraperitoneal de 3,5 ml de uretano al 10 %. Estos animales se perfundieron con la solución fijadora para el posterior estudio histológico a las 5 horas después de la administración.

- 3 animales recibieron una inyección intraperitoneal de 3 ml de uretano al 10 %. Dos de ellos se perfundieron a las 5 horas y uno a las 24 horas tras la administración.

El anestésico utilizado en este caso para el proceso de fijación de los órganos fue el hidrato de cloral (450 mg/Kg) en solución al 6 %.

2.2. Administración de una dosis de busulfán por vía intraperitoneal. Grupo 2.

Este grupo estaba constituido por 5 animales:

- 1 de ellos recibió una inyección intraperitoneal de 1 ml de una solución de busulfán, de 50 mg/ml en DMSO, y se perfundió con solución fijadora a las 5 horas después de la administración.

- 1 de ellos recibió una inyección intraperitoneal de 1 ml de una suspensión de busulfán, de 50 mg/ml en metilcelulosa al 0,25 %, y se perfundió a las 4,5 horas después de la administración.

- 2 de ellos recibieron una inyección intraperitoneal de 1,5 y 2,5 ml, respectivamente, de una solución de busulfán, de una concentración de 33,3 mg/ml en DMSO y aceite de oliva. Para su preparación, se disolvieron 200 mg de busulfán en 1 ml de DMSO y posteriormente se añadieron 5 ml de aceite de oliva. Dos horas después de la administración, el segundo animal empezó a presentar fuertes convulsiones y una hora más tarde murió. El primer animal empezó a tener fuertes convulsiones a las 3 horas de la administración y 3 horas después se perfundió con la solución fijadora.

- 1 de ellos recibió una inyección intraperitoneal de 1 ml de metilcelulosa al 0,25 % y durante 24 horas no se observó ninguna manifestación de toxicidad.