En el 66.66% de diabéticos hemos encontrado gran activación plaquetaria (33.3%), en la obesidad (20%), en el tabaquismo aumenta la agregación y la activación plaquetaria, en el 54.5 % de especímenes anémicos se observa activación plaquetaria aumentada y en el 60% de los casos de hipotiroidismo.

En el déficit familiar del factor plaquetario 3 se encuentra alargado el tiempo de sangría, con presencia de plaquetas grandes. Todas las funciones dinámicas plaquetarias (adhesividad, agregación con ADP, agregación con colágeno, retracción del coágulo) son normales, pero se encuentra un déficit de factor plaquetario 3 con repercusión sobre la coagulación plasmática. Se ha interpretado la anomalía plaquetaria como un engrosamiento de la membrana (paquidermia plaquetaria) que dificultaría la liberación de factor 3.

La enfermedad de Von Willebrand presenta alteraciones en la calidad de las plaquetas, déficit de factor 3 y disminución de la adhesividad y agregación. En la macroglobulinemia de Waldenström y en el mieloma múltiple el anclaje de globulinas anómalas sobre la membrana plaquetaria impide la liberación de factor 3.

El factor plaquetario 3 se ve evaluado indirectamente por el tiempo de coagulación y el consumo de protrombina 9. Esta última prueba evaluatoria del sistema intrínseco de la coagulación, constituye una manera indirecta de medir la tromboplastina intrínseca. Esta proteína debe actuar sobre toda la protrombina para convertirla en trombina. Si la producción de tromboplastina intrínseca resulta insuficiente, no toda la protrombina pasa a trombina y queda en el suero un remanente que puede valorarse. Existen disponibles dos tipos de métodos de medida de la protrombina residual, uno cualitativo y otro cuantitativo que es la determinación de factor II en una muestra de suero pero procediendo como si fuese plasma. 1-102.

La actividad procoagulante de las plaquetas o FP3 puede y debe estudiarse de manera directa mediante pruebas coagulométricas, ensayos cromogénicos de actividad protrombinasa o citometría de flujo. 10-529

Nosotros hemos elegido el método coagulométrico, optimizado por la automatización, que es más accesible para la generalidad de los laboratorios.

Materiales y métodos

Materiales: Plasma rico en plaquetas, caolín, cloruro de calcio 0.025M para técnicas de hemostasia, autoanalizador Metrolab 2100 made in argentina.

Muestra: 300 µl de PRP a las 2 horas de la extracción sanguínea + 30 µl de caolín + vortex suave + 5 minutos a temperatura ambiente.

Reactivo: Cloruro de calcio 0.025 M, caolín (solución saturada en agua destilada)

Técnica: Automática

Ficha técnica del autoanalizador M2100.

Tipo de técnica (5): (Tiempos)
Referencia (1): Factor
Longitud de onda: (660) nm
Referencia dicromática: (000) nm
Unidades: (segundos)
Volumen de la muestra: (200 µl)
1º reactivo: (200 µl)
2º reactivo: (0)
1º incubación: (10 minutos)
2º incubación: (0)
Límite inferior: (30)
Límite superior: (60)
L.bl/sustrato: (0.200)
Consumo/minuto: -
Factor: (1)
Cálculo: (1)

Parámetros del autoanalizador M 2100:

Tmax: Tiempo máximo de lectura en segundos, por ejemplo 600 segundos.

Umbral: Es la diferencia de lectura en absorbancias entre el plasma sin coagular y coagulado, por ejemplo 0.050.

Es decir, que dentro de los 600 segundos, toda variación de absorbancias del aparato igual o superior a 0.050, disparará el stop, concluirá la reacción y medirá el tiempo que ha tardado en coagular el plasma. Es conveniente fijar tiempos máximos altos de modo que el método logre medir plasmas muy anticoagulados.

Resultado:

1) Obtención del rango de referencia del método:

Performance intraensayo: en una corrida de una mezcla de 4 plasmas ricos en plaquetas de pacientes sin trastornos evidentes de la coagulación, efectuada a las 2 horas de las venipunciones, hemos obtenido los siguientes valores de FP3: 53.05; 49.09; 48.22; 47.33; 44.69; 44.26; 43.83; 39.87; 39.42; con un media de 45.36, una DS de 4.17 segundos, y un CV intraensayo de 9%. El valor de referencia, sumando y restando a la media 3 DS, es de 32.83-57.88

El CV intraensayo para un método inmunorradiométrico (IRMA) para la determinación de antígeno específico prostático (PSA), de sensibilidad y especificidad reconocidas universalmente, es de 7.1% según los datos aportados por el fabricante.

Performance interensayos: al estudiar la linealidad del método, que veremos más adelante, hemos obtenido que el intervalo de referencia para las muestras no patológicas, según una valoración interensayos, vendría dado por la media de los puntos de las diluciones 1:1, correspondiente a muestras de distintos plasmas sin diluir procesados en días diferentes, menos 3 DS y más 3 DS; es decir 44.90 más menos 11.19, o sea 33.70 a 56.80, que coincide con los valores anteriormente expuestos y con los valores de referencia del tiempo de tromboplastina parcial (KPTT), que es un FP3-time no autólogo. Por lo tanto definimos como valor normal para FP3, por el método coagulométrico expuesto, el rango de 32.83-57.88 ó, aproximando, de 30 a 60 segundos.

El CV del método en el control interensayo fue de 8.30%. Mientras que la media de los CV de las determinaciones de 14 analitos de química clínica y enzimología, evaluados en un control de calidad externo, y por lo tanto interensayo, efectuado en la provincia de Entre Ríos, República Argentina, en febrero del 2010 fue de 12.64%; donde se observa claramente la excelente performance del método propuesto para la evaluación de FP3.

La determinación inmunorradiométrica de PSA en controles interensayos posee, según el fabricante, un CV del 6.00%.