Elaboracion de una tecnica automatizada y validacion de la misma para la determinacion de factor plaquetario (FP3)
Autor: Dr. José Luis Bracco | Publicado:  25/08/2010 | Analisis Clinicos , Hematologia y Hemoterapia | |
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Elaboración de una técnica automatizada y validación de la misma para la determinación de factor plaquetario (FP3)

Dr. José Luis Bracco, Bioquímico, Jefe de laboratorio GNLAB. Laboratorio GNLAB (Laboratorio Gamma Nuclear). General Galarza 1082/86, Concepción el Uruguay, Provincia de Entre Ríos, República Argentina.

Resumen:

El factor plaquetario 3 (FP3) es un fosfolípido de la membrana plaquetaria con una pronunciada carga superficial electronegativa de suma utilidad en el anclaje al sitio de la reparación. Es el principal promotor del mecanismo intrínseco de la coagulación de la sangre y su disposición se ve potenciada en presencia de caolín. La prueba de valoración de FP3 consiste en la recalcificación de un plasma rico en plaquetas (PRP) activado con caolín, efectuada con metodología automática en un autoanalizador.

Como sus valores están influenciados por la cantidad y calidad de las plaquetas, calidad de la agregación, de la activación, y de la membrana plaquetaria, y como las plaquetas tienen injerencia en todas las etapas de la coagulación, la determinación de FP3 resulta de suma importancia en la evaluación plaquetaria y hemostática y es una prueba cuantitativa de mejor performance que el tiempo de sangría y la retracción del coágulo, con las que está relacionada fisiopatológicamente.

Si bien el factor plaquetario 3 se ve evaluado indirectamente por el tiempo de coagulación, el tiempo de Howell, y el consumo de protrombina; la actividad procoagulante de las plaquetas o FP3 debería ser evaluada de manera directa mediante pruebas de mayor sensibilidad como las determinaciones coagulométricas, ensayos cromogénicos de actividad protrombinasa o por citometría de flujo.

Nosotros hemos elegido el método coagulométrico, optimizado por la automatización, que es más accesible para la generalidad de los laboratorios.


Abstract:

Platelet factor 3 (FP3) is a platelet membrane phospholipid with a pronounced electronegative surface charge extremely useful in anchoring the repair site. It is the main promoter of mecanimo intrinsic blood clotting and readiness is enhanced in the presence of kaolin. Proof of valuation of FP3 is the recalcification of platelet-rich plasma (PRP) activated with kaolin, completed with an automatic autoanalyzer methodology. As their values are influenced by the quantity and quality of platelets, as aggregation, activation and platelet membrane, as platelets have interference at all stages of coagulation, the determination of FP3 is extremely important in evaluating platelet hemostatic and is a quantitative test of better performance than the bleeding time and clot retraction, with which it is linked pathophysiologically.

Although platelet factor 3 is assessed indirectly by the clotting time, the time of Howell, and consumption of prothrombin procoagulant activity of platelets, or FP3 should be assessed directly by testing the most sensitive determinations coagulometers , chromogenic assay and prothrombina seactivityby flor cytometry.

We have chosen the method coagulometer, optimized for automation, which is more accesible to the generality of the laboratorios.

Palabras clave: factor plaquetario 3, caolín, tromboplastina intrínseca, recalcificación de PRP, agregación y activación plaquetaria, autoanalizador, especificidad, linealidad, precisión, exactitud.


Keywords: platelet factor 3, Kaolín, thromboplastin intrinsic recalcification of PRP, platelet aggregation and activation, autoanalyzer, specificity, linearity, accuracy, accuracy.

Introducción:

Las plaquetas al ser sometidas a distintos estímulos liberan una lipoproteína de membrana, el factor plaquetario 3 (FP3), necesaria para la conversión intrínseca de factor II (protrombina) en factor II activo (trombina). La liberación puede lograrse por fragmentación mecánica o por caolín. La primera dejaría mayor cantidad de FP3 disponible, pero el caolín libera un 25 a 30% de FP3 que es lo que ocurre fisiológicamente durante la coagulación normal. La incubación de plasma rico en plaquetas (PRP) con caolín produce también la activación de los factores XI (antecedente tromboplastínico plasmático) y XII (factor Hageman) que actúan como tromboplastina intrínseca.

Si el tiempo de tromboplastina parcial (KPTT) de la muestra en estudio es normal, se emplea PRP del propio paciente para evaluar FP3, si el KPTT es anormal se pueden usar, si se prefiere, plaquetas del paciente y plasma pobre en plaquetas (PPP) de un dador normal 1 en la proporción 1:8 de PRP autólogo y 7:8 de PPP heterólogo. 2 De cualquiera de las formas se obtienen datos interesantes para considerar, siempre y cuando se determine el FP3 como una prueba más dentro del coagulograma, o si se evalúa conjuntamente con el tiempo de tromboplastina parcial (KPTT).

La determinación consiste en una prueba de recalcificación del plasma rico en plaquetas de los especímenes en estudio activados por caolín, conocida por los anglosajones como PF3 time; y universalmente como Prueba de Spaet o Tiempo de Stypven.

De las cuatro fases de la coagulación: vascular o fase 1, plaquetaria o fase 2, sanguínea o fase 3, y fibrinolítica o fase 4; la determinación de FP3 tiene relación con la fase de liberación que ocurre inmediatamente después de la agregación plaquetaria, e inicia la fase sanguínea o coagulación propiamente dicha. Por lo que sus valores estarán influenciados por la cantidad y calidad de las plaquetas, calidad de la agregación, de la activación y de la membrana plaquetaria.

La trombostenina, proteína plaquetaria contráctil necesaria para la retracción del coágulo, está involucrada también en la reacción que conduce a la agregación plaquetaria, y puede proveer puentes interplaquetarios durante la agregación, por lo que es probable que defectos en la disposición o en la calidad de la trombostenina estuvieran también asociados a disminución del FP3. 3

Es de esperar, entonces, que patologías asociadas con una retracción del coágulo anómala cursen con alteraciones del FP3 time.

La fisiología de la retracción del coágulo ex vivo tiene algunas variantes insospechadas que no hemos encontrado descriptas en ninguna bibliografía. Resulta interesante, por ejemplo, observar que en PRP inducidos con FP3 exógeno (heterólogo) o con su sustituto cefalina-caolín, la retracción del coágulo se completa en 60 minutos, mientras que en PRP inducidos con caolín para la generación de FP3 autólogo, no ocurre la retracción del coágulo. Tampoco se produce la misma en la recalcificación de un PPP según Howell, lo cual era de esperar y demuestra la importancia del rol plaquetario en la retracción.

Las plaquetas son necesarias para la coagulación sanguínea propiamente dicha y en su ausencia generalmente, aunque no siempre, el tiempo de coagulación aumenta, obteniéndose valores de 1.4 veces más largos para los tiempos de Howell efectuados sobre PPP respecto a los efectuados sobre PRP. Es decir que las plaquetas condicionan la fase 2 plaquetaria y la 3 sanguínea, pero además, por contener antiplasmina, proteína que inhibe la lisis de coágulos de fibrina, ejercen un rol de importancia en el mecanismo de la fibrinolisis, es decir en la fase 4. Los productos de degradación de la fibrina generados tienen, a su vez, poder de agregantes plaquetarios. 3



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Revista de Medicina y Ciencias de la Salud, de periodicidad quincenal, dirigida a los profesionales de la Salud de habla hispana. ISSN 1886-8924