Modelo de estudio del choque directo radioactivo independiente del efecto peroxido .4
El citoplasma amplio, delgado y sin granulaciones groseras permite el estudio de las organelas, el retículo endoplásmico, el Golgi, las mitocondrias, cuando se elige convenientemente el modelo de inducción empleado.
Muestra de sangre normal inducida por un xenobiótico. Nótese la presencia de un leucocito polimorfonuclear neutrófilo trilobular con organelas hipertrofiadas en su interior, de disposición paralela, que podrían corresponder a mitocondrias.
Materiales y métodos
Materiales:
1- EDTA
2- Trazador de 125 Iodo
3- Colorante hematológico Giemsa
4- Microscopio UV VIS Alphaphot, YSH, Nikon.
5- Cámara fotográfica reflex Zenit TTL con película de 35 mm, de 100-120 ASA, grano normal.
6- Adaptador microfotográfico transocular marca Pentax c/alargadores de teflón fabricados por nosotros.
7- Pulsador con traba, para fotografías con tiempo amentado de exposición.
Fundamentación de las condiciones de cultivo:
En las experiencias de inducción elaboradas por nosotros el tema clave a considerar era doble, por un lado la conservación de la muestra en términos metabólicos lo menos alejado posible del metabolismo in vivo, por otro lado la conservación de la muestra en términos de viabilidad. Si disminuíamos la temperatura de incubación de modo de incrementar la viabilidad deprimíamos demasiado el metabolismo celular y la morfogénesis inducida. Por lo tanto optamos por una temperatura intermedia, de alrededor de 30 ºC, de modo que la ralentización de los procesos metabólicos permita a las células incrementar en parte su viabilidad disminuida. (8) En estas condiciones de incubación, y basándonos en algunas consideraciones especulativas de la teoría hematológica que seguidamente detallaremos, logramos el seguimiento de la viabilidad durante dos semanas en medio autólogo mínimo adicionado de algunos agentes de inducción, sin la necesidad de aporte externo de oxígeno.
Los basamentos teóricos fueron los siguientes:
1- Los fagocitos tisulares y sanguíneos corresponden a un mismo tipo celular adaptado a sus respectivos nichos ecológicos.
2- Los fagocitos tisulares desarrollan un metabolismo aerobio o anaerobio en dependencia de las tensiones de oxígeno de los nichos ecológicos, teniendo una respiración aerobia los fagocitos pulmonares y un metabolismo anaerobio los fagocitos intestinales.
3- El aspecto macroscópico de las muestras hematológicas cultivadas en medio mínimo, conservadas por 72 horas a temperatura ambiente denotan una viabilidad conservada de la oxihemoglobina.
4- No se observan células falciformes en las muestras cultivadas, por 72 y más horas. Esto significa que en el interior del container de cultivo cerrado, se conserva una determinada y suficiente tensión de oxígeno.
En muestras de sangre edetatada sin inducir ni irradiar, cultivadas en medio mínimo a 30oC 48 horas, se observa un neutrófilo de adaptación, con las siguientes características morfológicas:
a) perdió los filamentos interlobulillares,
b) los lóbulos se volvieron cariopicnóticos.
c) Se observa una única microvacuola, lo cual indica escasas alteraciones de membrana, depresión del metabolismo celular, y/o eficiencia mantenida de las peroxidasas celulares. No se observan hematíes falciformes.
Muestra: Sangre entera edetatada normal y leucémica.
Método: Inducción en medio autólogo mínimo a 30 ºC
Siembra: 100µl de trazador +100µl de sangre edetatada
Revelado: Se efectuaron extendidos a las 4, 24 y 56 horas, tincionándose con M.G.G. y microfotografiándose las imágenes microscópicas obtenidas con máquina fotográfica Reflex Zenit TTL (URSS), adaptador pentax transocular, microscopio Nikon YSH. Las películas utilizadas fueron Kodak color de 35 mm, 100 asa, grano normal, y el tiempo de exposición osciló entre 15 y 30 segundos.
Resultado:
En fotos correspondientes a extendidos radioinducidos de sangre normal efectuados a las 4 horas de exposición se observan neutrófilos con pseudoaspecto de metamielocito neutrófilos en transición a band cell N, como si hubiera ocurrido una involución de LPMNn hacia células de su progenie.
Se observa unilobulación con presencia, en algunos, de ventana de Owren-Oswald. Ocurre aumento del volumen celular o tumefacción, con aspecto amorfo de la estructura nuclear eucromatínica y presencia de acúmulos de heterocromatina. Se observa discreto engrosamiento de la membrana nuclear y moderado de la citoplasmática. Escasa afectación de los organitos con escasa manchas citoplasmáticas atípicas. No se observan patentes de daño de membranas como la vacuolización nuclear o la citoplasmática, ni alteraciones del ergastoplasma y de las mitocondrias.
Paraforma de neutrófilo con pseudoinmaduración inducida por la radiación: núcleo en ojo de pájaro.